Če vaša beljakovina ni enake velikosti kot vaše protitelo, lahko eluirate z 0,1M glicinom, pH2-3 in nato ločite beljakovino, ki vas zanima od protitelesa z uporabo SEC (kot superdex 200).
Kaj je eluiranje beljakovin?
Proteini se eluirajo z gradientom naraščajočih količin organskega topila, kot je acetonitril. Beljakovine se eluirajo glede na njihovo hidrofobnost. Po čiščenju s HPLC je beljakovina v raztopini, ki vsebuje samo hlapne spojine in jo je mogoče zlahka liofilizirati.
Zakaj imajo beljakovine nizko eluiranje pH?
Uporaba pufra z nizkim pH za eluiranje iz proteina A je znano, da prispeva k agregaciji produkta Vendar pa bolj omejen niz dokazov kaže, da nizek pH morda ni edini vzrok za agregacijo v kromatografiji proteina A lahko bistveno prispevajo drugi vidiki procesa.
Kako se izvaja eluiranje?
V analitični in organski kemiji je elucija proces ekstrahiranja enega materiala iz drugega s pranjem s topilom; kot pri pranju naloženih ionsko izmenjevalnih smol za odstranitev ujetih ionov. … Potem ko molekule topila izpodrinejo analit, ga lahko vzamemo iz kolone za analizo.
Koliko protiteles potrebujete za Coip?
Za rutinske poskuse Co-IP je protitelo, ki sem ga uporabil, ne več kot 2ug (V mojem nizu zadostuje 1,4 -2,0 ug protitelesa za zajemanje 2500-5000 ug beljakovinski lizat.) Vendar je še vedno odvisno od stopnje izražanja vaših ciljnih beljakovin v vaših vzorcih, zato boste verjetno morali narediti nekaj sprememb.
How Much Protein Do You Need? Explained by Dr. Berg
