Naslednji je pregled različnih korakov protokola posrednega imunofluorescenčnega barvanja
- Načrtovanje eksperimenta in priprava vzorca. …
- Pritrditev vzorca. …
- Cell Permeabilization. …
- Blokiranje. …
- Primarna inkubacija protiteles. …
- sekundarna inkubacija protiteles. …
- Protibarvanje in montaža.
Kako izvajate imunofluorescenco?
Vsi koraki inkubacije potekajo pri sobni temperaturi
- Celice dvakrat sperite in s pinceto previdno položite pokrovno steklo z obrnjenimi celicami v vlažno komoro.
- Popravite s 4 % formaldehida 10 minut in operite 3 ×.
- Permeabilizirajte z 0,1 % TX-100/PBS 15–20 minut in operite 3 ×.
Kako uporabljate imunofluorescenco v celici?
Protokol imunofluorescence za adherentne celice
- Semena 1–1,5 x104 celice na vdolbino 4-komornega stekelca v 500 ml gojišča. Inkubirajte pri 37°C pri 5% CO2.
- 32–36 ur po setvi celic, odstranite medij celične kulture in 3-krat sperite celice s 500 µL 1X PBS.
Kaj je primer imunofluorescence?
Na primer, raziskovalec lahko ustvari primarna protitelesa pri kozi, ki prepoznajo več antigenov, in nato uporabi z barvilom vezana zajčja sekundarna protitelesa, ki prepoznajo konstantno regijo protiteles koz ( kunčja protikozja protitelesa).
Kaj je uporaba imunofluorescenčnega barvanja?
Imunofluorescenčno (IF) barvanje je široko uporabljena tehnika v bioloških raziskavah in klinični diagnostiki IF uporablja fluorescenčno označena protitelesa za odkrivanje specifičnih ciljnih antigenov. Sledi slikanje, to je zelo neposredna tehnika, saj lahko nekaj dejansko vidite.