Bimolekularna fluorescenčna komplementacija (BiFC) je metoda, ki se uporablja za neposredno vizualizacijo interakcije beljakovin in beljakovin in vivo z uporaboslikanja živih celic ali fiksnih celic. … BiFC so prvi opisali Hu et al.
Kako deluje bimolekularna fluorescenčna komplementacija?
Načelo delovanja BiFC temelji na razvoju fluorescenčnega kompleksa, ki je posledica povezave dveh segmentov fluorescenčnega proteina, ko sta v neposredni bližini zaradi interakcije protein-beljakovina v fragmentih, t.j., v BiFC je fluorofor razdeljen na amino in karboksilni terminal.
Kaj je test BiFC?
bimolekularna fluorescenčna komplementacija (BiFC) test omogoča preprosto in neposredno vizualizacijo interakcij beljakovin v živih celicah (45). BiFC pristop temelji na tvorbi fluorescenčnega kompleksa, ko dva proteina, spojena z nefluorescenčnimi fragmenti fluorescenčnega proteina, medsebojno delujeta (slika
Zakaj je opravljen BiFC test?
Ideja BiFC je izražati polovice GFP, spojenih z beljakovinami, ki vas zanimajo Če so POI interakcije, lahko obe polovici združite, da dobite funkcionalen GFP. Torej, če je v celici izražena polovica GFP, nisem presenečen, da ga protitelo GFP lahko zazna.
Ali je BiFC reverzibilen?
Ireverzibilnost kompleksov BiFC je dobro dokumentirana (10) in zdi se, da je večina, če ne vsi, sistemi BiFC, ki temeljijo na fluorescenčnih proteinih , nepovratnih (8, 33, 43, 48–51).
